三、培訓(xùn)內(nèi)容：

一）重組蛋白藥和發(fā)酵概述

1、重組蛋白藥的發(fā)展歷史及現(xiàn)狀

2、重組蛋白藥的表達(dá)系統(tǒng)

3、發(fā)酵工藝的基本概念

4、相關(guān)工藝設(shè)備和發(fā)酵工藝的操作模式

二）大腸桿菌重組蛋白發(fā)酵

1、菌株構(gòu)建知識簡介

1.1 合適的宿主選擇：B系列與K系列

1.2 多樣的表達(dá)載體：pET, pQE, pBAD, pUC

1.3 不同的誘導(dǎo)方式：IPTG、溫度、阿拉伯糖

1.4 改進(jìn)大腸桿菌蛋白表達(dá)的最新分子生物學(xué)技術(shù)（重點：分子生物學(xué)）

2、小試發(fā)酵工藝的開發(fā)

2.1 常用培養(yǎng)基的選擇

2.2 （培養(yǎng)條件（PH、溫度、溶氧、補(bǔ)料等）的優(yōu)化）重點

2.3 高通量篩選技術(shù)與設(shè)備（重點：篩選）

4、大腸桿菌發(fā)酵工藝放大策略

4.1 發(fā)酵工藝放大帶來的問題解決(生產(chǎn)曲線與產(chǎn)量；培養(yǎng)基和補(bǔ)料優(yōu)化等)

4.2 發(fā)酵工藝放大需遵循的一般原則，典型的大尺度發(fā)酵流程（重點：放大、原則）

4.3 大尺度發(fā)酵工藝參數(shù)的再確定與優(yōu)化 （重點：工藝參數(shù)）

4.4 各階段工藝變更計劃

三）畢赤酵母重組蛋白發(fā)酵

1、畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)簡介

1.1 AOX1啟動子

1.2 分泌表達(dá)

1.3 密碼子優(yōu)化

1.4 基因拷貝數(shù)

2、畢赤酵母發(fā)酵工藝開發(fā)方法及放大策略

2.1 常用培養(yǎng)基介紹，一般的補(bǔ)料分批發(fā)酵流程

2.2 發(fā)酵工藝參數(shù)（溫度、PH、溶氧、攪拌、OD、補(bǔ)料等）的影響及優(yōu)化方法（重點：工藝參數(shù)、優(yōu)化方法）

2.3 發(fā)酵工藝放大需重點解決的問題策略（重點）

3、發(fā)酵過程控制

3.1 發(fā)酵過程數(shù)據(jù)監(jiān)測的新進(jìn)展

3.2 發(fā)酵動力學(xué)模型的建立與應(yīng)用（重點：動力學(xué)模型）

3.3 過程參數(shù)的控制與優(yōu)化 （重點：過程參數(shù)）

3.4 放大考量要素

4、畢赤酵母高密度發(fā)酵的補(bǔ)料調(diào)控策略探討

四）QbD理念指導(dǎo)的發(fā)酵實驗設(shè)計方法（DOE）與實施

3.1 什么是QbD

3.2 不同生命周期階段的QbD

3.3 目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量概況、關(guān)鍵質(zhì)量屬性的概念與案例（重點：目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量概況、關(guān)鍵質(zhì)量屬性）

3.4 設(shè)計空間和控制策略 （重點）

3.5 什么是DOE

3.6 DOE的流程

3.7 實驗設(shè)計的基本原則與常用類型

3.8 穩(wěn)健參數(shù)設(shè)計的設(shè)計方法與發(fā)酵實驗中的應(yīng)用（重點：穩(wěn)健參數(shù)設(shè)計的設(shè)計方法）

五）重組蛋白發(fā)酵難點問題與展望

1、重組蛋白發(fā)酵過程易發(fā)問題（重點：易發(fā)問題）

2、GMP體系下發(fā)酵工藝開發(fā)、各階段工藝變更計劃及生產(chǎn)

3、噬菌體污染的防治

4、下游工藝銜接

5、商業(yè)化生產(chǎn)模式下的思考(重點：IPAT、不同工藝配置、工廠的設(shè)計)